高級醫(yī)學檢驗技師考試題庫

酶免疫技術常用的底物知識點小結

1.HRP的底物　作為供氫體的底物化合物較多，常用的有以下幾種：

（1）鄰苯二胺（OPD）：OPD被認為是HRP最為敏感的色原底物之一。0PD在HRP的作用下顯橙黃色，加強酸如硫酸或鹽酸終止反應后呈棕黃色，最大吸收峰在492nm波長。OPD是ELISA中應用最早的底物，但其應用液穩(wěn)定性差，易變色，需新配制后在1小時內(nèi)使用，顯色反應過程需避光，而且具有致癌性。

（2）四甲基聯(lián)苯胺（TMB）：TMB是一種優(yōu)于OPD的新型HRP色原底物。TMB經(jīng)HRP作用后變?yōu)樗{色，加入硫酸終止反應后變?yōu)辄S色，最大吸收峰波長為450nm。TMB具有穩(wěn)定性好，成色無需避光，無致突變作用等優(yōu)點，已成為目前ELISA中應用最廣泛的底物。缺點是水溶性差。

（3）其他：5-氨基水楊酸（5-ASA）和2，2-聯(lián)氮-二（3-乙基-苯并噻唑-6-磺酸）二銨鹽（ABTS）也是HRP常用的底物。

2.AP的底物　常用對-硝基苯磷酸脂（p-NPP），p-NPP經(jīng)AP作用后的產(chǎn)物為黃色對硝基酚，最大吸收峰波長為405nm。

3. β-半乳糖苷酶（β-Gal）的底物 常用4-甲基傘酮基-R-D半乳糖苷（4-MUU），酶作用后，生成高強度熒光物4-甲基傘形酮（4-MU），其敏度性較HRP高30～50倍，但測量時需用熒光計。