檢驗職稱考試網(wǎng)課

酶活性測定的常見方法總結(jié)

（1）定時法：（兩點法）

通過測定酶反應開始后某一時間段內(nèi)（t1到t2）產(chǎn)物或底物濃度的總變化量來求取酶反應初速度的方法。其中t1往往取反應開始的時間。

酶與底物在一定溫度下作用一段固定的時間，通過加入強酸、強堿、蛋白醫(yī)學教育網(wǎng)整理沉淀劑等，使反應完全停止（也叫中止反應法）。加入試劑進入化學反應呈色測出底物和產(chǎn)物的變化。

該法最基本的一點是停止反應后才測定底物或物的變化。

優(yōu)點：簡單易行，對試劑要求不高。

缺點：難保證測定結(jié)果的真實性。

難以確定反應時間段酶促反應是否處于線性期。隨著保溫時間的延續(xù)，酶變性失活加速。

（2）連續(xù)監(jiān)測法：

又稱為動力學法或速率法、連續(xù)反應法。

在酶反應過程中，用儀器監(jiān)測某一反應產(chǎn)物或底物濃度隨時間的變化所發(fā)生的改變，通過計算求出酶反應初速度。

連續(xù)監(jiān)測法根據(jù)連續(xù)測得的數(shù)據(jù)，可選擇線性期的底物或產(chǎn)物變化速率用于計算酶活力。

因此連續(xù)監(jiān)測法測定酶活性比定時法更準確。

實際工作中，采用工具酶的酶偶聯(lián)法已經(jīng)成為醫(yī)學教育網(wǎng)整理應用最廣、最頻繁測酶活性濃度的方法。

（3）平衡法：

通過測定酶反應開始至反應達到平衡時產(chǎn)物或底物濃度總變化量來求出酶活力的方法，又叫終點法。